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小鼠ELISA試劑盒標(biāo)本的采取與保存

2023-11-28 [582]


大部分小鼠ELISA試劑盒檢測均以血清為標(biāo)本。

1.血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標(biāo)記的小鼠ELISA試劑盒測定中,如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。


2.一般說來,在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。


3.超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。


4.混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。


5.反復(fù)凍融會使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。


6.保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。


7.抗凝不完-全的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。


8.加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在小鼠ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。


9.在建立小鼠ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2 小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)頂-峰。


10.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,小鼠ELISA試劑盒也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。


11.應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。


12.由于公司的ELISA試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。


13.另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。

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