ELISA檢測試劑盒實驗流程:
1.實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2.加樣(標準品及樣本)100uL,37°C孵育1小時;
3.吸棄,加檢測溶液A100uL,37°C孵育1小時;
4.洗板3次;
5.加檢測溶液B100uL,37°C孵育30分鐘;
6.洗板5次;
7.加TMB底物90uL,37C孵育10-20分鐘;

8.加終止液50uL,立即450nm讀數(shù)。

ELISA檢測試劑盒注意事項:

1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2,濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫
助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品fl*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)(x5xn)。
5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7,嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶
標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.如以說明書有異,以說明書為準
ELISA檢測試劑盒操作技術(shù)要求:
1、加樣量的準確與否,直接影響抗原抗體結(jié)合物的濃度,直至最后顯色的深淺。吸嘴插入血清不可太深,若插入太深,吸嘴外壁可能粘連太多血清,輕微的抖動動即可將吸咀外壁的血清濺入其它包被孔中,造成交叉污染。加樣時應(yīng)盡可能的垂直加樣,并加在包被孔的底部,不可加在孔的上部。標本量大時,可考慮使用排槍加試劑,可提高速度,但使用排槍時應(yīng)注意吸嘴一定要裝好,不可松動,否則會影響加樣量的準確度。加樣時保持顯色劑不外流,顯色劑應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
2、加樣時間間隔對結(jié)果也有一定的影響,在競爭法試驗中,理論上應(yīng)該是標本與酶標抗體混合后同時加入反應(yīng)孔,若標本先于酶標抗體加入反應(yīng)孔,則標本會先與包被抗體進行反應(yīng),造成特假陽性。若是有干擾物質(zhì)存在時表現(xiàn)明顯,在公平條件下,干擾物質(zhì)與包被抗體的結(jié)合能力會低于標本,而在非公平條件下,干擾物質(zhì)會優(yōu)先與包被抗體進行結(jié)合,出現(xiàn)假陽性。做HBcAb項目時,若標本與酶加樣時間間隔太長,會引起吸光度的趨勢性變化,會造成吸光度的降低。特別是針對臨界值標本,出現(xiàn)假陽性。